Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Посев шпателем

При
посеве тампоном чашку кое-что открывают
одной рукой, тампоном касаются поверхности
агара возле края чашки и начинают
проводить занял штрихами от края к краю
чашки, втирая осторожно материал в
поверхность среды, не повреждая его,
постепенно вращая тампон. После проведения
посева чашку вращают на 90°и
повторяют занял перпендикулярно к
предыдущему.

При
посеве уколом в столбик питательной
среды пробирку
с м’ясо-пептонним агаром,
желатином и тому подобное берут в левую
руку, петлю с материалом – в праву и
делают укол к дну пробирки в среду. Петлю
осторожно вынимают, а пробирку закрывают.

Посев
материала в толщу питательной среды. Перед
посевом материал должен быть в жидком
состоянии. Стерильной градуированной
пипеткой набирают 0,1, 0,5 или 1,0 мл материалу
и выливают его в стерильные чашки Петри.

После этого материал заливают
15-20 мл растопленного
и охлажденного до 45-50 °С МПА.
Осторожно покачивая чашку, круговыми
движениями по поверхности стола перемешивают
в ней материал, достигая его равномерного
деления в среде. Чашку оставляют закрытой
к полному застудневанию агара, а затем
переворачивают вверх дном.

Для
того, чтобы выделить чистую культуру
микроорганизмов, следует отделить
многочисленные бактерии, которые
находятся в материале, одна от другой.
Это можно достичь с помощью методов,
которые основаны на двух принципах
– механическом и биологическом разобщении
бактерий.

Механический
принцип

Биологический
принцип

МЕТОДЫ

1.
Фракционных разведений Л. Пастера

2.
Пластинчастых разведений Р. Коха

3.
Поверхностных посевов Дригальського

4.
Поверхностных штрихов

МЕТОДЫ

Приймают
во внимание:

а
– тип дыхания (метод Фортнера);

б
– подвижность (метод Шукевича);

в
– кислотоустойчивость;

г
– спорообразование;

д
– температурный оптимум;

е  –  избирательную  чувствительность
лабораторных животных к бактериям

III модуль «Инфекция и инфекционный процесс»

Цель:
знать:понятие «инфекционого
процесса», «инфекционного заболевания»;
виды и формы инфекции; факторы патогенности
бактерий; вирулентность и единицы
вирулентности; биологический метод
диагностики инфекционных заболеваний;
основные цели и этапы биологического
метода.

уметь:определять основные факторы
патогенности бактерий (структуры
бактериальной клетки, токсины и
экзоферменты).

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Задание
на дом:

  1. Вопросы для самоподготовки:

    1. Учение об
      инфекции. Понятия «инфекция» и
      «инфекционное заболевание»

    2. Формы
      симбиоза

    3. Классификации
      инфекционных заболеваний и форм
      инфекций

    4. Периоды и
      исходы инфекционного заболевания

    5. Патогенность
      и вирулентность, единицы вирулентности

    6. Основные
      факторы патогенности микроорганизмов

    7. Микробные
      токсины

    8. Биологический
      метод диагностики инфекционных
      заболеваний

  2. Базовый текст

Учение
об инфекции – это
учениео
свойствах микробов, позволяющих им
существовать в макроорганизме и
оказывать на него патогенное воздействие,
а также учение о защитно-приспособительных
реакциях макроорганизма, препятствующих
болезнетворному воздействию микробов
на него.

Инфекция
(позднелат. infectio
– заражение, от лат.
infictio-
вношу что-либо вредное, заражаю) или
синоним инфекционный
процесс
обозначает совокупность
физиологических
(адаптационных) и патологических
восста­новительно-приспособительных
реакций, возникающих в восприимчивом
макроор­ганизме при определенных
условиях окру­жающей внешней среды
в результате его взаимодействия с
проникшими и размно­жающимися в нем
патогенными
или ус­ловно-патогенными бактериями,
грибами и вирусами и направленных на
поддержание постоянства внутренней
среды макроорга­низма (гомеостаза).

Инвазия
– инфекционный
процесс, вызванный
простейшими, гельминтами и насекомыми
– представителями царства Animalia.

Инфекционное
заболевание –
наиболее выраженная форма инфекционного
процесса, для которой характерно наличие
определенного возбудителя, инкубационного
периода, специфичных для данной болезни
симптомов и иммунного ответа.

В
развитии инфекционного процесса
взаимодействуют три фактора: 1) патогенный
(условно-патогенный) микроорганизм; 2)
восприимчивый макроорганизм; 3) условия
внешней среды.

  1. Формы
    симбиоза

Симбиоз
(от греч. symbiosis,
совместное проживание) – совместное
длительное существование микроорганизмов
в долгоживущих сообществах. Взаимоотношения,
при которых микроорганизм располагается
вне клеток хозяина (более крупного
организма), известны как эктосимбиоз;

Мутуализм
(mutuus,
взаимный) – взаимовыгодные симбиотические
отношения. Так, микроорганизмы
вырабатывают витамины группы В,
необходимые организму хозяина, при
этом организм хозяина является для них
средой обитания.

Комменсализм
– разновидность симбиоза, при которой
выгоду извлекает только один партнер
(не принося «видимого» вреда другому);
микроорганизмы, участвующие в таком
симбиозе называются комменсалами
(сотрапезниками), например, микроорганизмы,
колонизирующие кожные покровы. Поставить
четкую грань между мутуализмом и
комменсализмом весьма трудно.

Антагонистический
симбиоз –
симбиотические взаимоотношения,
наносящие хозяину более или менее
выраженный вред; его крайнее проявление
– паразитизм. Проникая в организм
хозяина, они могут вызывать у него
заболевание, поэтому их обозначают как
патогенные микроорганизмы.

Факультативные паразиты.В зависимости
от внешних условий некоторые микробы
могут вести себя как паразиты, либо как
сапрофиты (условно-патогенные
микроорганизмы).

Облигатные
паразиты
полностью утратили собственные
метаболические возможности и живут,
разрушая ткани хозяна.

Метабиоз.В ряде биотопов, особенно
в почве, некоторые микроорганизмы
утилизируют продукты жизнедеятельности
других; например, нитрифицирующие
бактерии используют аммиак, который
образуют аммонифицирующие бактерии.

Саттелизм.Некоторые микроорганизмы,
выделяют метаболиты, стимулирующие
рост других микробов. Например, сарцины
или стафилококки выделяют ростовые
факторы, стимулирующие рост бактерий
родаHaemophylus. Нередко
совместный рост нескольких видов
микробов активирует их физиологические
свойства.

Тема 1: Химиопрепараты,
антибиотики. Определение чувствительности
микрооргнизмов к антибиотикам

Цель занятия:
знатьклассификацию,
основные группы химиопрепаратов и
антибиотиков, механизм их действия,
побочное действие, получение антибиотиков;
методы определения чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам.

уметьставить опыт по определению чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам методом
бумажных дисков; учитывать результаты
определения спектра действия антибиотиков,
чувствительности микроорганизмов к
антибиотикам методом серийных разведений.

I.
Вопросы для самоподготовки:

    1. Основные группы
      химиопрепаратов и антибиотиков

    2. Механизмы действия
      антибиотиков на микроорганизмы

    3. Побочное действие
      антибиотиков

    4. Механизмы
      антибиотикорезистентности микроорганизмов

    5. Методы определения
      чувствительности микроорганизмов к
      антибиотикам

II. Базовый текст

1. Основные
группы химиопрепаратов и антибиотиков

Основная цель
применения антибактериальных агентов
– подавление размножения или уничтожение
возбудителя при отсутствии токсического
действия на клетки организма. В настоящее
время арсенал антибактериальных средств
составляют антибиотики и химиопрепараты.

Классификация по способу
получения:

  • природные (биосинтетические) – их
    продуцентами выступают специальные
    штаммы микроорганизмов (хлорамфеникол);

  • синтетические – источником их получения
    является химический синтез (левомицетин);

  • полусинтетические – получают химическим
    соединением природного антибиотика,
    точнее его «ядра», с различными
    химическими радикалами.

Классификация по типу продуцента:

  • антибиотики, синтезируемые грибами
    (бензилпенициллин, цефалоспорины);

  • антибиотики, синтезируемые актиномицетами
    (стрептомицин, эритромицин и др.);

  • антибиотики, синтезируемые бактериями
    (полимиксины и др.).

Классификация по
характеру действия:

  • микробоцидные
    губительно действующие на микробы
    за счет необратимых повреждений
    (пенициллины, цефалоспорины)

  • микробостатические
    – ингибирующие
    рост и размножение микробов (макролиды,
    тетрациклины).

Классификация по спектру действия:

  • узкого спектра – активны в отношении
    небольшого количества разновиднос­тей
    или грамположительных, или грамотрицательных
    бактерий;

  • широкого спектра – активны в отношении
    грамположительных и грамотрицательных
    бактерий

Классификация антибиотиков по
химическому строению:

  • бета-лактамные антибиотики

  • аминогликозиды

  • тетрациклины

  • макролиды

  • линкозамиды

  • гликопептиды

  • полипептиды

  • полиены

  • антрациклиновые
    антибиотики

Бета-лактамные
антибиотики(основу
молекулы составляет бета-лактамное
кольцо):Пенициллины
— группа
природных, продуцируемых грибами рода
Penicillum,
и полусинтетических антибиотиков,
молекула которых содержит
6-аминопенициллановую
кислоту, состоящую из 2 колец –
тиазолидонового и беталактамного.

  • биосинтетические
    (пенициллин
    G
    — бензилпенициллин)

  • аминопенициллины
    (амоксициллин, ампициллин, бекампициллин)

  • полусинтетические
    “антистафилококковые” пенициллины
    (оксациллин,
    метициллин, клоксациллин, диклоксациллин,
    флуклоксациллин),
    основное преимущество которых —
    устойчивость
    к микробным бета-лактамазам, в первую
    очередь продуцируемым стафилококками

Цефалоспорины
— это природные
и полусинтетические антибио­тики,
полученные на основе 7-аминоцефалоспориновой
кисло­ты и
содержащие цефемовое (также бета-лактамное)
кольцо,т. е. по структуре они близки
к пенициллинам:

  • 1-го поколения — цепорин, цефалотин,
    цефалексин;

  • 2-го поколения — цефазолин (кефзол),
    цефамезин, цефамандол (мандол);

  • 3-го поколения — цефуроксим
    (кетоцеф), цефотаксим (клафоран),
    цефуроксим аксетил (зиннат), цефтриаксон
    (лонгацеф), цефтазидим (фортум);

  • 4-го поколения — цефепим, цефпиром
    (цефром, кейтен) и др.;

Карбапенемы
(имипенем,
меропенеми
др.)—
из всех бета-лактамов
имеют самый широкий спектр действия и
резистентны к бета-лактамазам.

Монобактамы
(азтреонам
(азактам),
небактами
др.) —
резистентны
к бета-лактамазам.
Спектр действия узкий (очень активны
против грамотрицательных бактерий, в
том числе против синегнойной
палочки).

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Аминогликозидысодержат
аминосахара, соединенные гликозидной
связью с остальной частью (агликоновым
фрагментом) молекулы:

  • синтетические
    аминогликозиды

    стрептомицин, гентамицин (гарамицин),
    канамицин, неомицин, мономицин,
    сизомицин, тобрамицин (тобра);

  • полусинтетические
    аминогликозиды —
    спектиномицин,
    амикацин (амикин), нетилмицин
    (нетиллин).

ПОДРОБНОСТИ:   Пиявки и антибиотики совместимость

Тетрациклины -полифункцио­нальное
гидронафтаценовое соединение с родовым
названием тетрациклин:

  • природныететрациклины — тетрациклин,
    окситетрациклин (клинимицин);

  • полусинтетическиететрациклины
    — метациклин, хлортетрин, доксициклин
    (вибрамицин), миноциклин, ролитетрациклин.

Макролидысодержат в своей
молекуле макроциклическое лактоновое
кольцо, связанное с одним или не­сколькими
углеводными остатками: эритромицин,
олеандомицин, рокситромицин (рулид),
азитромицин (сумамед), кларитромицин
(клацид), спирамицин, диритромицин.

Метод штрихов

Метод
последовательных разведений,
предложен Л. Пастером, был одним из самых
первых, который применялся для
механического разъединения микроорганизмов.
Он заключается в проведении последовательных
серийных разведений материала, который
содержит микробов, в стерильной жидкой питательной
среде.

Этого
недостатка не имеет метод
Коха (метод пластинчатых разведений).
Р.  Кох использовал плотные питательные
среды на основе желатины или агар-агара.
Материал с ассоциациями разных видов
бактерий разводился в нескольких
пробирках с растопленным и кое-что
охлажденным желатином, содержание
которых позже выливалось на стерильные
стеклянные пластины.

После застудневания
среды оно культивировалось при оптимальной
температуре. В его толще образовывались
изолированные колонии микроорганизмов,
которые легко могут быть перенесены на
свежую питательную среду с помощью
платиновой петли для получения чистой
культуры бактерий.

Метод
Дригальского является
более совершенным методом, который
широко распространен в повседневной
микробиологической практике. Сначала
на поверхность среды в чашке Петри
пипеткой или петлей наносят исследуемый
материал.

С помощью металлического или
стеклянного шпателя его тщательным
образом втирают в среду. Чашку во время
посева держат привидкритою и
осторожно вращают, чтобы равномерно
распределить материал. Не стерилизуя
шпателя, проводят им занял материалу в
другой чашке Петри, при потребности –
в третьей.

Только после этого шпатель
окунают в дезинфикуючий раствор
или прожаривают в пламени горелки. На
поверхности среды в первой чашке
наблюдаем, как правило, сплошной рост
бактерий, во второй – густой рост, а в
третьей – рост в виде изолированных
колоний.

Для
получения изолированных колоний можно
использовать занял тампоном, которым
проводили забор исследуемого материала.
Несколько приоткрываютчашку
Петри с питательной средой, вносят туда
тампон и осторожными движениями втирают
материал в поверхность чашки, возвращая
постепенно тампон и чашку.

Таким
образом, существенное преимущество
методов пластинчатых разведений Коха,
Дригальского и штриховых посевов
заключается в том, что они создают
изолированные колонии микроорганизмов,
которые при инокуляции на
другую питательную среду превращаются
в чистую культуру

Базовый текст

1.
Микрофлора организма человека

Нормальная
микрофлора сопутствует своему хозяину
на протяжении всей его жизни. Такие
отношения микроорганизмов с макроорганизмом
можно назвать симбиотическими. Симбиоз
– взаимосвязанный метаболизм разнородных
живых систем.

В этой связи учение о
нормальной микрофлоре человека и ее
нарушениях представляет собой весьма
существенный раздел медицинской
микробиологии. В настоящее время твердо
установленным является положение о
том, что организм человека и населяющие
его микроорганизмы — это единая
экосистема.

Микробиоценоз
– совокупность
всех симбионтов, населяющих организм
человека и находящихся в метаболическом
взаимодействии с ним и друг другом.

Количественные колебания бактерий в
биоценозе могут достигать для некоторых
бактерий нескольких порядков и, тем не
менее, укладываются в принятые нормативы.
Сформировавшийся микробиоценоз
существует как единое целое, формируя
биопленку.

Совокупность микробных биоценозов,
встречающихся в организме здоровых
людей, составляет нормальную микрофлору
человека. Установлено, что нормальная
микрофлора обладает достаточно высокой
видовой и индивидуальной специфичностью
и стабильностью.

Нормальная микрофлора отдельных
биотопов(поверхности кожи, слизистых
оболочек тела и др.) различна.

Некоторые биотопы стабильны по своему
составу, а другие постоянно меняются
за счет транзиторной микрофлоры. В
состав нормальной микрофлоры входят
как анаэробные, так и аэробные бактерии,
соотношение которых в большинстве
биоценозов составляет 10:1, 100:1 и 1000:1.

В любом микробиоценозе следует различать:

  • постоянную, или резидентную микрофлору
    (индигенную, автохтонную
    )
    представлена относительно стабильным
    составом микроорганизмов, обычно
    обнаруживаемых в определенных местах
    тела человека у людей определенного
    возраста;

  • транзиторную, или временную микрофлору
    (аллохтонную)
    — попадает на кожу или
    слизистые оболочки из окружающей
    среды, не вызывая заболеваний и не
    обитая постоянно на поверхностях тела
    человека. Она представлена сапрофитными
    условно-патогенными микроорганизмами,
    которые обитают на коже или слизистых
    оболочках в течение нескольких часов,
    дней или недель. Присутствие транзиторной
    микрофлоры определяется не только
    поступлением микроорганизмов из
    окружающей среды, но и состоянием
    иммунной системы организма хозяина и
    составом постоянной нормальной
    микрофлоры. Состав транзиторной
    микрофлоры может меняться в зависимости
    от различных экзо- и эндогенных факторов:
    возраста, условий внешней среды, условий
    труда, рациона питания, перенесенных
    заболеваний, травм и стрессовых
    ситуаций.

В норме многие ткани и органы здорового
человека свободны от микроорганизмов,
т.е. стерильны (внутренние органы,
головной и спинной мозг, альвеолы
легких, внутреннее и среднее ухо, кровь,
лимфа, спинномозговая жидкость, матка,
почки, мочеточники и моча в мочевом
пузыре).

Нормальная микрофлора кожи. Местом
обитания транзиторных микроорганизмов
чаще всего становится кожа вследствие
постоянного контакта с внешней средой.
Имеется стабильная и хорошо изученная
постоянная микрофлора, состав которой
различен в разных анатомических зонах
в зависимости от содержания кислорода
в окружающей бактерии среде (аэробы —
анаэробы) и близости к слизистым
обо­лочкам (рот, нос, перианальная
область), особенностей секре­ции и
даже одежды человека.

Особенно обильно
заселены микроорганизмами те области
кожных покровов, которые защищены от
действия света и высыхания: подмышечные
впадины, межпальцевые промежутки,
паховые складки, промежность.

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

В составе резидентноймикрофлоры
кожи и слизистых оболочек присутствуют:Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Micrococcus
spp., Sarcina spp., коринеформные бактерии,Propionibacterium spp.

В зонах, где имеются скопления сальных
желез (гениталии, наружное ухо),
встречаются кислотоустойчивые
непатогенные микобактерии. Значительное
большинство микроорганизмов, в том
числе патогенных, не проникает через
неповрежденные кожные покровы и погибает
под воздействием бактерицидных свойств
кожи.

К числу таких факторов, которые
могут оказывать существенное влияние
на удаление непостоянных микроорганизмов
с поверхности кожи, относятся кислая
реакция среды, наличие жирных кислот
в секретах сальных желез и присутствие
лизоцима.

Ни обильное потоотделение,
ни мытье или купание не могут удалить
нормальную постоянную микрофлору или
существен­но повлиять на ее состав,
так как микрофлора быстро восста­навливается
вследствие выхода микроорганизмов из
сальных и потовых желез, даже в тех
случаях, когда контакт с другими
участками кожи или с внешней средой
полностью прекращен.

Поэтому увеличение
обсемененности того или иного участка
кожи в результате уменьшения бактерицидных
свойств кожи может служить показателем
снижения иммунологической ре­активности
макроорганизма.

В нормальной микрофлоре глаза(конъюнктивы) доминирующими микроорганизмами
на слизистых оболочках глаза являются
дифтероиды (коринеформные бактерии),
нейссерии, грамотрицательные бактерии,
преимущественно родаMoraxella.

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Нередко
обнаруживаются стафилококки, стрептококки,
микоплазмы. На количество и состав
конъюнктивальной микрофлоры значительное
влияние оказывает слезная жидкость, в
которой содержится лизоцим, обладающий
антибактериальной активностью.

Особенностью нормальной микрофлоры
ухаявляется то, что в среднем ухе в
норме микробов не содержится, так как
ушная сера обладает бактерицидными
свойствами. Но они все же могут проникать
в среднее ухо через евстахиеву трубу
из глотки.

Для нормальной микрофлоры верхних
дыхательных путейхарактерно почти
полное отсутствие микроорганизмов из
внешней среды, так как большая часть
их задерживается в полости носа, где
погибает через некоторое время.

Собственная микрофлора носа представлена
коринебактериями (дифтероидами),
нейссериями, коагулазо-отрицательными
стафилококками, альфа-гемолитическими
стрептококками. В качестве транзиторных
видов могут присутствоватьStaphylococcus
aureus, Escherichia coli,
бета-гемолитические стрептококки.

Нормальная микрофлоразеваеще
более разнообразна, поскольку здесь
смешивается микрофлора полости рта и
воздухоносных путей. Представителями
резидентной микрофлоры считаются
нейссерии, дифтероиды, альфа-гемолитические
и гамма-гемолитические стрептококки,
энтерококки, микоплазмы,
коагулазо-отрицательные стафилококки,
моракселлы, бактероиды, боррелии,
трепонемы, актиномицеты.

Слизистая
оболочка гортани, трахеи, бронхов и
всех нижележащих отделов сохраняется
стерильной благодаря активности их
эпителия, макрофагов, а также продукции
секреторного иммуноглобулина А.

Несовершенство этих защитных механизмов
у недоношенных детей, нарушение их
функционирования в результате
иммунодефицитных состояний или при
ингаляционном наркозе приводит к
проникновению микроорганизмов вглубь
бронхиального дерева и, соответственно,
может быть одной из причин тяжелых
респираторных заболеваний.

В составе нормальной микрофлоры полости
рта и пищеварительного тракта в настоящее
время описано несколько сотен видов
микроорганизмов. Уже при прохождении
через родовой канал может происходить
контаминация слизистой оболочки ротовой
полости и глотки ребенка.

Через 4—12 ч
после родов в составе микрофлоры полости
рта обнаруживают зеленящие
(альфа-гемолитические) стрептококки,
которые сопутствуют человеку в течение
всей его жизни. В организм ребенка они
попадают, вероятно, из организма матери
или от обслуживающего персонала.

ПОДРОБНОСТИ:   Муж Анны Горшковой - личная жизнь, биография, дети, фото

К этим
микроорганизмам уже в раннем детстве
добавляются стафилококки, грамотрицательные
диплококки (нейссерии), коринебактерии
(дифтероиды), иногда молочнокислые
бактерии (лактобациллы). Во время
прорезывания зубов на слизистых
оболочках поселяются анаэробные
спирохеты, бактероиды, фузобактерии,
лактобациллы.

Нормальная микрофлораверхних
отделов желудочно-кишечного тракта.
Наибольшие микробные скопления у
взрослых образуются в следующих отделах
полости рта: межзубных промежутках,
физиологических десневых карманах
(гингивальной борозде), зубных бляшках,
на спинке языка, особенно в задних ее
отделах.

При нормальном состоянии зубов
и слизистой оболочки и отсутствии
нарушений секреции слюны, жевания,
глотания количество микроорганизмов
в ротовой полости взрослых зависит от
состояния межзубных промежутков,
продолжительности интервалов между
приемами пищи, ее консистенции,
гигиенического ухода за зубами.

Тема 2: Инфекционный процесс. Факторы патогенности бактерий. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний

Культуральные
признаки бактерий изучают по характеру
роста на плотных питательных средах
типа ГРМ-агар в чашках Петри и по штриху
на поверхности скошенной ПС. Также
исследуют характер роста в жидких ПС
типа ГРМ-бульон, отмечая наличие
характерного бактериального запаха.

1.
Описать культуральные признаки бактерий
(по росту на плотной ПС в чашке Петри,
на скошенной ПС в пробирке и в жидкой
ПС), посеянных на предыдущем занятии.
Результаты оформить в виде таблицы
(табл. 1).

Таблица 1 –
Культуральные признаки.

Название
колонии

Признаки

Размер
колонии

Форма
колонии

Цвет
(пигмен-тация)

Поверхность
колонии

Оптический
свойства

Профиль
колонии

Край
колонии

Консистенция

Изнанка

Запах

Морфологическая
идентификация – определение
вида бактерий за их морфологическими
признаками.

Принимают
во внимание форму и внешние признаки
бактерии (кокки, палочки,
спирохеты), навнисть капсулы,
споры, жгутиков.

Морфологическая
и тинкториальна идентификация
бактерий.

Культуральная
идентификация – определение
вида бактерий за их культуральными
свойствами.

Принимают
во внимание характер роста бактерий на
жидких и плотных питательных средах
(характеристика колоний, рост на жидкой
среде).

Итог: Основные виды идентификации чистых культур

Бактериофаги
имеют выраженное литическое действие
на микроорганизмы. Эту особенность
используют для определения их вида. С
этой целью в две пробирки с мясо-пептонним
бульйоном засевают
исследуемую культуру бактерий.

Потом
в одну из них добавляют несколько капель
индикаторного фага.
Пробирки инкубируют при оптимальной
температуре в течение 18-24 год.
Сравнивают мутность бульйона в
контрольной и опытной пробирке и делают
вывод о чувствительности микроорганизмов
к литическому действию бактериофагов.

Можно
с этой целью использовать плотную
питательную среду, на которую газоном
засевают исследуемую культуру бактерий.
После подсушивания чашек на них
бактериологической петлей или пастеровской
пипеткой наносят каплю соответствующего
разведения бактериофагу, которое указано
на ампуле.

Посевы инкубируют в термостате
при 37 °С в течение 18-24 год и
фиксируют наличие прозрачных круглых
пятен, которые свидетельствуют о
литическом действии бактериофагу.
Позитивный результат свидетельствует
о принадлежности бактерий к определенному
виду.

Фаготипмрование
микроорганизмов проводят
с целью анализа эпидемиологической
ситуации для определения источника
инфекции. Чаще всего его выполняют при
диагностике стафилококковых, кишечных
и других инфекций.

В
основе теста лежит
определение фаговариантов (фаговаров)
возбудителей. Для этого дно чашки
с м’ясо-пептонним агаром
за числом бактериофагов разделяют на
квадраты. Выращивают
четырехчасовую бульйонну культуру
исследуемого штамма и 1 мл ее
засевают на поверхность среды.

Распределяют
равномерно культуру по поверхности
среды и избыток ее сливают. Чашку
подсушивают в термостате при 37 °С в
течение 30-40 мин и
на поверхность агара в каждый квадрат
капают пипеткой бактериофаги
соответствующих разведений.

Посевы
ставят в термостат или оставляют при
комнатной температуре в течение
18-20 год,
после чего оценивают результаты. Учет
результатов проводят на темном фоне с
помощью лупы. В зависимости от степени
чувствительности культуры к бактериофагам
выделяют разные степени лизису бактерий,
который оценивается по чотириплюсовою системе:
от лизиса, который сливается к его
отсутствию.

В
счётных камерах Горяева можно произвести
подсчёт крупных микробных клеток –
дрожжей, одноклеточных водорослей,
конидий, спор грибов, некоторых бактерий.
Счетная камера представляет собой
толстостенное предметное стекло с
нанесёнными на нём поперечными прорезами,
которые образуют три поперечно
расположенные плоские площадки.

Средняя
площадка продольным прорезом разделена
пополам, причем на каждой половине
нанесена квадратная сетка (рис. 9, а).
Две
боковые площадки расположены на 0,1 мм
выше средней (рис. 9, б). Эти площадки
служат для притирания покровного стекла
к средней площадке.

Сетка
разделена на определенное число больших
и маленьких квадратов, по-разному
сгруппированных.

Сторона
квадрата (ABCD,
рис. 12, в) равна 1/20 мм, площадь –1/400 мм2,
высота – 1/10 мм объём– 1/4000 мм3или
1/4000000 см3.
Большой квадрат ABCD,
состоит из 16 малых квадратиков.

Рис.
12.
Счётная камера Горяева: а – вид сверху;
б – вид сбоку (h
– высота камеры),

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

в
– вид при малом увеличении микроскопа.

Каплю
взвеси наносят на сетку камеры и сверху
накрывают чистым покровным стеклом.
Большими пальцами покровное стекло
плотно притирают к боковым площадкам
камеры до появления ньютоновских колец.

Камеру
с исследуемым материалом помещают на
предметный столик микроскопа и
микроскопируют с объективом 8х
и 40х.

Просчитывают
количество клеток в пяти больших
квадратах, учитывая все клетки, размещенные
внутри квадрата и на пограничных линиях.

N
= (a
· 1000) · K/(h
· S),

где
N
– число клеток в 1 см3
суспензии; а – среднее число клеток в
большом квадрате; h
– глубина камеры, мм; S
– площадь квадрата, мм2;
К – разведение исходной суспензии; 1000 –
коэффициент пересчёта мм3
в см3.

1.
Изучить устройство камеры Горяева,
притереть покровное стекло до появления
ньютоновских колец.

2.
Определить титр дрожжевой суспензии
прямым счетом в камере Горяева. Рассчитать
количество дрожжей в суспензии.

Идентификация микроорганизмов с помощью бактериофагов

Цель занятия: знатьпредставителей нормальной микрофлоры
организма человека; роль нормальной
микрофлоры для жизнедеятельности
организма человека; причины возникновения
и принципы диагностики и лечения
дисбактериоза;

основы санитарной
микробиологии: показатели
санитарно-бактериологического состояния
воды, воздуха и почвы (коли-индекс,
коли-титр, общее микробное число (ОМЧ)
и методы их определения; санитарно-показательные
микроорганизмы воды, воздуха и почвы.

уметьучитывать результаты определения
коли-индекса, коли-титра, ОМЧ воды; ОМЧ
воздуха и почвы.

Бактериоцини
является веществами антибиотической
природы, которые продуцируются разными
бактериями. Они имеют достаточно узкий
спектр противомикробного действия,
направленный против филогенетично близких
возбудителей.

Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний

  1. Микрофлора
    организма человека

  2. Функции
    нормальной микрофлоры организма
    человека

  3. Методы
    определения микрофлоры организма
    человека

  4. Определение
    понятия дисбактериоз и причины его
    возникновения

  5. Принципы
    диагностики и лечения дисбактериоза

  6. Предмет
    санитарной микробиологии и требования,
    предъявляемые к санитарнопоказательным
    микроорганизмам

  7. Микрофлора
    воды, воздуха и почвы

  8. Методы
    определения санитарно-показательных
    микроорганизмов воды, воздуха и почвы

  1. Основные
    группы химиопрепаратов и антибиотиков

  2. Механизмы
    действия антибиотиков на микроорганизмы

  3. Побочное
    действие антибиотиков

  4. Механизмы
    антибиотикорезистентности микроорганизмов

  5. Методы
    определения чувствительности
    микроорганизмов к антибиотикам

  6. Понятия
    «инфекция» и «инфекционное заболевание»

  7. Формы
    симбиоза

  8. Классификации
    инфекционных заболеваний и форм
    инфекций

  9. Периоды
    и исходы инфекционного заболевания

  10. Патогенность
    и вирулентность, единицы вирулентности

  11. Основные
    факторы патогенности микроорганизмов

  12. Микробные
    токсины

  13. Биологический
    метод диагностики инфекционных
    заболеваний

  14. Нормальная
    микрофлора различных биотопов организма
    человека

  15. Функции
    нормальной микрофлоры организма
    человека

  16. Методы
    определения микрофлоры организма
    человека

  17. Определение
    понятия дисбактериоз и причины его
    возникновения

  18. Принципы
    диагностики и лечения дисбактериоза

  19. Предмет
    санитарной микробиологии и требования,
    предъявляемые к санитарно-показательным
    микроорганизмам

  20. Микрофлора
    воды и методы ее определения

  21. Микрофлора
    воздуха и методы ее определения

  22. Микрофлора
    почвы и методы ее определения

Определение бактериоциногенности микроорганизмов

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

С
целью выявления сбраживающей способности
дрожжей производят высев исследуемых
культур на жидкие питательные среды,
содержащие не менее 2% глюкозы, находящиеся
в пробирках со вкладышами (маленькие
запаянные с одного конца трубочки) или
в трубках Дунбара.

1.
Приготовить
ПС типа Сабуро-бульон (глюкоза – 4%,
пептон – 1%), заполнить ею трубки Дунбара
или пробирки со вкладышами. Закрыть
ватно-марлевыми пробками, простерилизовать.

2.
Произвести посев изучаемых дрожжевых
культур на жидкую ПС.

3.
Определить наличие/отсутствие сбраживающей
способность у изучаемых дрожжевых
культур.

Бактериоцинотипирование (зоны задержки роста)

Для
определения бактериоциноваров на
поверхность агара в чашке Петри в виде
полоски по диаметру засевают
бактериологической петлей культуру
возбудителя. Чашку инкубируют в термостате
при оптимальной температуре в течение
24-48 год,
потом микроорганизмы убивают с
помощью УФВ или паровхлороформа.

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Культуру осторожно снимают из поверхности
агара с помощью шлифовального стекла,
и донеи перпендикулярно
штрихами бактериологической петлей
подсевают 4-часовые бульйонни культуры
индикаторных штаммов.

ПОДРОБНОСТИ:   Антибиотики при плеврите

После 18-24-часовой
инкубации при оптимальной температуре
оценивают чувствительность индикаторных
штаммов к бактериоцинив за
величиной зон задержки роста. Такой
подход позволяет
определить бактериоценотип исследуемых
микроорганизмов.

Для
определения чувствительности исследуемого
штамма к определенным бактериоцинив в
плотную питательную среду уколом
засевают индикаторные бактерии, которые
продуцируют определенные типы бактериоцинив.

После инкубации в термостате микробы,
которые выросли, инактивують за
помощью паривхлороформа
или ультрафиолетового облучения. Потом
на поверхность чашки заливают растопленный
и охлажденный к 45°С
МПА,
смешанный из 0,2 мл
4‑ часовой
бульйоннои культуры
исследуемого штамма.

После того, как
агар застигнет, чашку опять помещают в
термостат и инкубируют при оптимальной
температуре на протяжении суток. За
диаметрами зон задержки роста культуры
оценивают чувствительность ее к
бактериоцинив.

Молекулярно генетические методы

Для
выявления и идентификации бактерий,
вирусов, грибов и самых простых в
последнее время начали широко использовать
молекулярно генетические методы.

Реакция
гибридизации ДНК и РНК (реакция
генных зондов). Последовательность нуклеотидив ДНК
и РНК является
уникальной для геномов всех микроорганизмов.
Любой участок нуклеиновой кислоты можно
определить с помощью комплементарной
копии ДНК или РНК,
меченой ферментом или радиоактивной
меткой (ДНК- и
РНК-зонды).

Такие зонды получены для
большинства патогенных бактерий и
вирусов. За их помощью проводят
идентификацию ДНК или РНК возбудителей
бактериальных и вирусных инфекций в
клиническом материале. Реакция
молекулярной

гибридизации
является очень

чувствительной
и высокоспецифической. Она дает
возможность обнаруживать ДНК или РНК в
очень малых количествах (1-10 пг).

Методика
реакции генных зондов сводится к тому,
что выделенные из патологического
материала ДНК или РНК возбудителей
денатурируют и наносят на специальные
мембраны из нитроцеллюлозы.

Перечень практических навыков

  1. Определить
    спектр действия антибиотиков

  2. Определить
    чувствительность микроорганизмов к
    антибиотикам методом серийных разведений
    (количественный метод)

  3. Определить
    чувствительность микроорганизмов к
    антибиотикам методом бумажных дисков
    (качественный метод)

  4. Определить
    чувствительность микрофлоры зева к
    антибиотикам с помощью Е-теста

  5. Учесть
    результаты определения факторов
    патогенности стафилококков, гемолизина,
    лецитиназы и плазмокоагулазы

  6. Учесть
    результаты определения токсигенности
    дифтерийной палочки, зарисовать.

  7. Определить в готовых мазках капсульные
    бактерии

  8. Определить
    коли-индекса воды бродильным методом

  9. Определить
    коли-индекса воды методом мембранных
    фильтров

  10. Определить
    микрофлору воздуха седиментационным
    методом

  11. Интерпретировать
    результаты анализа на дисбактериоз
    кишечника

  12. Определить
    ОМЧ воды

  13. Определить
    ОМЧ почвы

  14. Решение
    ситуационных задач по материалу IIIмодуля

Характеристика колоній

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Биохимическая
идентификация – определение
вида бактерий за их биохимическими
признаками.

Принимают
во внимание цукролитични,
протеолитические, пептолитични,
редуцирующие, гемолитические и
другие ферментативни свойства
бактерий.

Рост
микроорганизмов на среде Олькеницкого.
1 – незасеянная среда; 2 – микроорганизмы
разлагают глюкозу до кислоты; 3 –
микроорганизмы разлагают глюкозу и
лактозу до кислоты и газа; 4 – микроорганизмы
образуют сероводород; 5 – рост
микроорганизмов, которые не разлагают
сахара.

Рис.
Определение редуцирующих свойств
бактерий.

Серологическая идентификация
– определение
вида бактерий за их антигенным строением.

Для
этого используют
специфические аглютинуючи антимикробные
сыворотки.

Модуль III «Основы антибактериальной химиотерапии»

Это
самая многочисленная группа антибиотиков,
включаю­щая разнообразные по своему
химическому составу природные соединения,
преимущественно продуцируемые
актиномицетами. К ним относятся
аминогликозидные антибиотики, группа
тетра­циклина, левомицетин, макролиды
и др.

К
данной группе относятся рифамицины —
родственные
ан­тибиотики,  продуцируемые  разными  видами  актиномицетов.

В
результате химической модификации
одного из них был полу­чен полусинтетический
аналог рифамицина, получивший название
рифампицин,   с  -более  ценными   антибиотическими   свойствами.

Рифампицин
обладает широким антибактериальным
спектром, оказывает бактерицидное
действие на грамположительные и
грамотрицательные бактерии,
неспорообразующие анаэробы (бактероиды
и др.), клостридии, иерсинии, гемофильную
палочку, лептоспиры.

Кроме того, рифампицин
активен в отношении микобактерий
туберкулеза. Устойчивыми к нему являются
спирохеты, микоплазмы, грибы, простейшие.
Рифампи­цин применяется главным
образом для лечения туберкулеза легких
и других органов, особенно если он вызван
бактериями, резистентными к другим
противотуберкулезным химиотерапевтическим
веществам.

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Механизм
антибактериального действия рифампицина
заключается в его способности подавлять
актив­ность ДНК-зависимой РНК-полимеразы
и тем самым блокиро­вать синтез белка
на уровне транскрипции.

II. Базовый текст

Гликопептидыв своей молекуле
содержат замещенные пептидные соединения:
ванкомицин (ванкацин, диатрацин),
тейкопланин (таргоцид), даптомицин.

Полипептидыв своей молекуле
содержат остатки полипептидных
соединений: грамицидин, полимиксины М
и В, бацитрацин, колистин.

Полиеныобладают ярко выраженной
проти­вогрибковой активностью,
изменяя проницаемость клеточной
мембраны путем взаимодействия
(блокирования) со стероид­ными
компонентами, входящими в ее состав
именно у грибов, а не у бактерий: нистатин,
афортецин В.

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Антрациклины –
противоопухоле­вые
антибиотики: доксорубицин, карминомицин,
рубомицин, акларубицин.

Вна­стоящее время в практике
широко используют антибиотики, не
относящиеся ни к одной из перечисленных
групп: фосфомицин, фузидиевая ки­слота
(фузидин), рифампицин.

Аминогликозидные антибиотики

Первый
антибиотик этой группы стрептомицин
был выделен 3. Ваксманом с соавторами
еще в 1943
г. вслед за пеницилли­ном. В настоящее
время в группу включены стрептомицина
суль­фат, стрептосульфамицина сульфат,
дегидрострептомицина суль­фат и др.

Стрептомицин является
сложным органическим основанием,
молекула которого состоит из трех
частей: стрептидина, стрептозы
и N-метилглюкозамина.

Антибактериальный
спектр стрептомицина и его производных
включает большое число видов
грамотрицательных бактерий: кишечная
палочка, шигеллы, клебсиеллы, бруцеллы,
бактерии туляремии, чумы, вибрион холеры.

Механизм
антибактериального действия стрептомицина
заключается в способности блокировать
субъ­единицу рибосомы 30S,
а также нарушать считывание генети­ческого
кода. При этом кодоны иРНК неправильно
считываются антикодонами тРНК- Например,
кодон УУУ, кодирующий
фенилаланин, считывается какАУУ, в
результате чего его место занимает
изолейцин, что приводит к образованию
ненужного для бактериальной клетки
полипептида.

Недостатком
стрептомицина является быстрое
возникновение к нему резистентных
бактерий.

К
аминогликозидам 1-го поколения наряду
со стрептомици­ном относятся мономицин,
неомицин, канамицин; аминогликозиды
2-го поколения — гентамицин, тобрамицин,
сизомицин, амикацин (полусинтетическое
производное канамицина).

Перечисленные
антибиотики отличаются друг от друга
по химической структуре и фармакологическим
свойствам.

Антибактериальный
спектр этих антибиотиков в основном
сходен со стрептомициновым. Однако
чувствительность к каж­дому из них
варьирует в зависимости от вида и штамма
пере­численных бактерий. Например, к
мономицину более чувстви­тельны
стафилококки, шигеллы, клебсиеллы,
малочувствитель­ны стрептококки,
чувствительность протеев широко
изменяется.

Гентамицин
более активен, чем другие аминогликозиды,
в отношении протеев, тобрамицин —
синегнойной палочки. Сизомицин по
антибактериальному спектру близок к
гентамицину, но отличается от него более
высокой активностью. Амикацин является
одним  из  наиболее
активных аминогликозидов.

Резистентность
бактерий к аминогликозидным антибиотикам
в отличие от стрептомицина формируется
постепенно. Кроме того, бактерии,
резистентные к одному из препаратов
группы стрептомицина, приобретают
устойчивость и к другим препара­там
этой группы, но сохраняют чувствительность
к аминоглико­зидным антибиотикам.

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Вместе с тем бактерии обычно приобре­тают
перекрестную устойчивость к неомицину,
мономицину, канамицину или к гентамицину,
тобрамицину, сизомицину. Однако многие
из них сохраняют при этом чувствительность
к амикацину.

Левомицетин

Левомицетин
представляет собой синтетический
антибиотик, идентичный природному
хлорамфениколу, который образуется
некоторыми видами актиномицетовОн
имеет относительно простой химический
состав. В его молекуле содержится два
ассиметричных атома углерода (обве­дены
кружком).

Антибактериальный
спектр левомицетина вклю­чает
грамположительные и грамотрицательные
бактерии, спиро­хеты, риккетсий,
хламидии. К нему высокочувствительны
многие штаммы пиогенных кокков, особенно
пневмококки, а также возбудители дифтерии
и сибирской язвы.

Резистентность
бактерий к левомицетину развивается
относи­тельно медленно. Левомицетин
действует на штаммы .бактерий, устойчивые
к пенициллину, стрептомицину,
сульфаниламидам. В обычных дозах вызывает
бактериостатический эффект.

Механизм
антибактериального действия левомицетина
состоит в подавлении пептидилтрансферазной
ре­акции с 50 S субъединицей
рибосомы, в результате чего прекра­щается
синтез белка в бактериальной клетке.

Линкомицин

Антибиотик,
продуцируемый некоторыми видами
актиномицетов. По химической структуре
является 4-алкилзамещенным соединением
гиграновой кислотыАнтибактериальный
спектр. Линкомицин обла­дает
бактериостатическим действием.

Наиболее
чувствительны к нему патогенные кокки,
а также бактерии дифтерии, сибирской
язвы,. некоторые возбудители анаэробной
раневой инфекции. На грамотрицательные
бактерии не действует. Активен в
отно­шении бактерий, резистентных к
пенициллину и другим анти­биотикам.
Резистентность к линкомицину развивается
посте­пенно.

Механизм
антибактериального действия связан с
подавлением синтеза белка при
взаимодействии с 50 S субъединицей
рибосомы.


высокая избирательность антимикробного
эффекта в дозах, нетоксичных для
организма;


отсутствие или медленное развитие
резистентности возбудителей к препарату
во время его применения;


сохранение антимикробного эффекта в
жидкостях организма, экссудатах, тканях,
отсутствие или низкий уровень связывания
белками сыворотки крови,инактивации тканевыми
ферментами;

– всасывание,
распределение препарата, который
обеспечивает терапевтические концентрации
в крови, тканях, жидкостях, которые
быстро достигаются и поддерживаются в
течение  длительного
периода; создание высоких концентраций
препарата в моче,  желчи,
калении, очагах поражения;


удобная врачебная форма, которая
обеспечивает  максимальный
эффект, и остается стабильной  при
обычных условиях хранения.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Beauty-Krasota.ru
Adblock detector