Иммуногистохимия (ИГХ-анализ) рака молочной железы: что показывает, расшифровка результатов. Как проводится игх анализ

Суть и возможности метода

При наличии в организме онкологического процесса, в кровь попадают антигены. Их наличие указывает на патологию, а конкретный тип на место локализации новообразования. С его помощью можно более точно поставить диагноз и определиться с эффективностью лечения.

Суть исследования заключается в выявлении антигенов, что возможно посредствам проведения ряда тестов. Используются реактивы, в состав которых входят «меченые» антитела. Эти белковые структуры имеют определенный цвет, который придают им специализированные красители.

Антитела способны выискивать антигены и вступать с ними в связи. Подобная реакция называется «антиген-антитело», когда с помощью меченых клеток удается определить наличие антигенов, указывающих на наличие злокачественного опухолевого процесса.

С помощью иммуногистохимического исследования можно выявить не только наличие онкогенных маркеров, но и определить некоторые рецепторы к гормонам, что эффективно при гормонозависящем типе опухоли или прогрессирующих эндокринных заболеваниях.

Результаты исследования показывают:

  1. Гистологическую принадлежность опухоли, что подтверждает или опровергает наличие рака.
  2. Локализацию опухолевого процесса и органы-мишени, которые в дальнейшем пострадают – это позволяет максимально направить все методы лечения на подавление патологического процесса именно в конкретном участке тела.
  3. Возможную методику лечения и резистентность клеток к определенным видам медикаментов. Врач может прогнозировать, насколько эффективным будет тот или иной препарат для конкретного пациента. Это минимизирует риски развития побочных воздействий и отсутствие терапевтического эффекта.

Иммуногистохимия является самым достоверным исследованием, которое помогает определить тип раковых клеток. Уровень погрешности минимален, что указывает на высокую точность результатов.

Иммуногистохимия
Иммуногистохимия очень точно определяет тип раковых клеток

Неоспоримым преимуществом иммуногистохимии является точное выявление типа рака и места его локализации (очага). Выявить это никакими другими сверхточными методиками невозможно. Именно окрашивание образца биоматериала показывает, какие клетки имеются в опухоли, как они себя ведут, и как будет вести себя при воздействии на них определенных способов лечения.

Диагностика, основанная на химической реакции, помогает выявить опухолевый процесс на самых ранних стадиях. Это увеличивает шансы на благоприятный исход.

Иммуногистохимия (ИГХ-анализ) рака молочной железы: что показывает, расшифровка результатов. Как проводится игх анализ

На точность результатов влияют некоторые внешние факторы, в том числе и прием гормональных препаратов. За несколько дней до проведения биопсии показан отказ от всех лекарств, диета и отсутствие физических нагрузок.

Невыполнение этих рекомендаций увеличивает риск появления неточностей в результатах исследования. При желании анализ можно сдавать в двух лабораториях одновременно, что снизит вероятность погрешности.

Цель исследования

ИГХ при онкологических патологиях грудных желез осуществляют, чтобы:

  • установить вид заболевания, восприимчивый к определенной терапии;
  • выявить метастазы, пущенные опухолью, и степень их распространения;
  • найти источник метастазов;
  • установить стадию развития выявленной опухоли;
  • оценить действенность терапии;
  • узнать скорость распространения метастазов;
  • выявить чувствительность кровяных клеток к конкретным лекарственным веществам для отсеивания неэффективных медикаментов.

Противопоказания

Диагностическое исследование применяется для определения состояния любой части человеческого организма. Назначают процедуру не только при раке грудных желез, но и при любых новообразованиях, предположительно являющихся злокачественными. Посредством ИГХ определяют состояние эндометрия при:

  • появлении метастазов;
  • патологиях матки;
  • бесплодии;
  • неудачных процедурах ЭКО;
  • болезнях органов тазовой области, имеющих разную этиологию;
  • постоянном самопроизвольном прерывании беременности.

Противопоказаний к проведению процедуры нет. Отказываются от исследования, только если по каким-либо причинам у пациента невозможно взять биоматериал.

Исследование необходимо в следующих ситуациях:

  1. При наличии опухоли, которая подает нечеткие эхо-признаки, что требует установления ее природы.
  2. Если имеются метастазы для выявления мест их локализации, что помогает поставить стадию рака.
  3. Составление прогноза и скорости распространения опухолевого процесса.
  4. При необходимости исследования чувствительности рецепторов к определенным видам гормонов, если у человека имеются нарушения в работе эндокринной системы.
  5. Если врач сомневается в методике проведения выбранного типа медикаментозного лечения или отсутствует какой-либо терапевтический эффект.

Показанием служит выраженный опухолевый процесс в любых частях тела. Иммуногистохимия показывает степень его злокачественности, возможный прогноз и толерантность к медикаментам.

Исследование эффективно в диагностике патологий репродуктивной системы при невозможности забеременеть и выносить ребенка. Показанием являются:

  • хронические заболевания матки и яичников;
  • бесплодие и самопроизвольные выкидыши на ранних сроках;
  • патологическое разрастание эндометрия.
Иммуногистохимия
Иммуногистохимия показана при наличии заболеваний яичников

Методика помогает определить, имеются ли в организме женщины клетки, которые препятствуют наступлению беременности.

Не существует противопоказаний к иммуногистохимии в принципе. Невозможность исследования обусловлена невозможностью забора биоптата, что возможно при расположении опухоли в глубоких слоях тканей и органов, при внедрении в которые есть риски развития смертельно опасных осложнений. Это касается опухолей головного мозга, внутренних частей органов.

ПОДРОБНОСТИ:   KOREA 365. Праздники в Южной Корее в 2019 году

Способы проведения исследования

Реакцию можно получить несколькими способами. Часто применяется прямой, при котором используется один вид маркированных антител. Последние должны связаться с выявляемым веществом или молекулой-мишенью. Если последняя присутствует в биоптате, то исследуемая ткань окрашивается.

Непрямой метод считается более информативным и чувствительным. Его суть заключается в поэтапном введении 2 разных антител. Немаркированные первичные антитела вступают в реакцию с опухолевым антигеном в биоптате, образуют комплекс антитело-антиген.

Исследование проходит в четыре этапа:

  1. Долабораторная подготовка образца – получение нужного образца осуществляют с помощью биопсии. Выбор метода зависит от места локализации опухоли, ее формы и распространенности опухолевого процесса. Часть иссеченных тканей помещают в раствор формалина, после чего образец передают в лабораторию. Еще одним преимуществом иммуногистохимии является возможность исследования через определенное время. Нет необходимости обрабатывать образец сразу, как только произведена биопсия. Образцы хорошо хранятся и показывают результаты не хуже, чем в день их забора.
  2. Подготовка образца к исследованию – биоматериал вводят в парафин, что необходимо для полной фиксации образца. Из полученных элементов тканей готовят тончайшие срезы, что возможно с помощью высокоточного оборудования. Чем тоньше срез, тем проще проследить химическую реакцию. Срезы укладывают на специальную панель, на которую в дальнейшем будет наноситься реагент.
  3. Окрашивание срезов посредствам введения антигенов – готовят несколько образцов, на которые воздействуют различными антителами. Полученный результат фиксируют по степени окрашенности конкретного участка среза. Одновременно можно выявлять до 10 типов антигенов, что позволяет установить точную природу опухоли.
  4. Оценка результатов – по истечению определенного времени (7-10 дней) с помощью высокоточного оборудования оценивают степень окраски образцов, делая заключение. Все полученные данные вносят в специальный бланк-расшифровку, который помогает при постановке точного диагноза. Его передают лечащему врачу, после чего подбирается соответствующее лечение.
Иммуногистохимия
Иммуногистохимия проходит в 4 этапа

Забор биоматериала осуществляют до начала лечения, чтобы оценить истинное положение вещей. Если использовались медикаменты, данные результатов будут несколько отличаться от истинных.

Для исследования используют часть биоматериала. Вторая часть может храниться в лаборатории. Это позволит снизить количество вмешательств в организм, особенно при выборе метода лечения. Нет необходимости сдавать биопсию повторно, чтобы установить, какой именно медикамент будет эффективен в той или иной ситуации.

Преимущество отдают тем лабораториям, в которых окрашивание образцов осуществляется автоматически. Минимизация человеческого вмешательства в процесс позволяет получать наиболее точные результаты.

Подготовка к исследованию

Перед процедурой пациентка:

  • не должна принимать гормональные лекарства (за неделю до взятия биоматериала);
  • не должна принимать медикаменты для остановки крови;
  • должна провести тщательные гигиенические процедуры.

Исследование проводят в конкретные дни менструального цикла:

  • на 5 – 7 день изучают патологические изменения эндометрия;
  • на 20 – 24 день оценивают секреторную и рецепторную деятельность.

Расшифровка результатов

Расшифровывая результаты, смотрят на прогестероновые (PR) и эстрогеновые (ER) рецепторы. При ИГХ также определяют количество рецептора человеческого эпидермального фактора роста (белок HER-2) во взятом у пациентки биоматериале. При злокачественной опухоли молочной железы HER-2 повышен.

При повышенном ER и PR в опухолевых тканях можно говорить, что злокачественное образование растет под воздействием гормонов. Если концентрация ER и PR не выходит за пределы нормы или выходит незначительно, то пациентка может надеяться на успешное лечение.

Расшифровывают показатели ИГХ по специальной цветовой шкале, соотнося цвета на шкале с оттенками биоматериала.

  1. 0 и 1. Концентрация белка соответствует норме. Терапевтические мероприятия не нужны.
  2. 2. Концентрация белка средняя. В грудной железе присутствует злокачественная опухоль. Обычно проводят дополнительное исследование, чтобы подтвердить верный результат первого теста. Дополнительное исследование называется FISH, позволяет узнать содержание белка в каждой клетке. Если HER-2 в норме, то FISH-тест даст положительный результат, если повышен, то отрицательный.
  3. 3. Концентрация белка намного выше нормального значения. Однозначно в грудной железе присутствует злокачественное новообразование.

Если тест показал высокую концентрацию белка, то опухоль агрессивного типа, растет интенсивно.

Иммуногистохимия (ИГХ-анализ) молочной железы

По результатам ИГХ выделяют 4 вида рака груди:

  • А-люминальный – рецепторы ER положительны, рецепторы к белку отрицательны, Ki-67 ниже 14%;
  • Б-люминальный – рецепторы ER и HER-2 отрицательны, Ki-67 выше 15%;
  • сверхэкспрессирующий – рецепторы ER и PR отрицательны, рецепторы к белку положительны;
  • базальноподобный – все рецепторы отрицательны.
ПОДРОБНОСТИ:   Гомеопатия Пульсатилла композитум (Pulsatilla compositum): инструкция по применению

Интерпретация результатов

В ходе проведенного исследования выявляется тип онкогенных клеток и их количество, что в дальнейшем способствует составлению точного прогноза. Внимание обращают на показатель Ki-67. Именно этот маркер показывает степень злокачественности процесса.

Когда показатель опухолевого процента менее 10%, прогноз благоприятный. При правильно подобранном комплексном лечении существует 95% вероятность перехода в пожизненную ремиссию с сохранением здоровья.

Чем выше процент онкогенности, тем неблагоприятнее прогноз и меньше шансов на жизнь.

Полученную расшифровку передают лечащему врачу-онкологу, под руководством которого будет проводиться лечение. Развернутый ответ на интересующий вопрос позволит подобрать наиболее оптимальные медикаменты, что увеличит шансы на полное выздоровление.

После проведения курса лечения иммуногистохимию производят повторно. На основании оценки количественного и качественного состава клеток можно прослеживать динамику и эффективность лечения. Отсутствие терапевтического эффекта может быть поводом для повторного проведения исследования, но в другой лаборатории.

Несмотря на высокую точность полученных результатов, диагноз ставится на основании комплексного обследования. Очень редко бывают случаи, когда данные иммуногистохимиии и гистологического исследования одного и того же образца давали разные значения.

Диагностические маркеры

По ним определяют наиболее вероятное поведение новообразования на момент проведения теста. Нет влияния терапии на исследование. Тест позволяет определить агрессивность опухоли. Прогноз важен для подбора наиболее подходящих медикаментов и лечебных процедур.

Исследование показывает действенность проводимого лечения. Если обнаружено наличие агрессивного рака, то назначают химиотерапию. 

Иммуногистохимия (ИГХ-анализ) рака молочной железы: что показывает, расшифровка результатов. Как проводится игх анализ

ИГХ – сложный тест, при котором используют большое количество онкологических маркеров. Чем больше маркеров проверяют, тем выше стоимость исследования. Тест эффективен в определении вида онкологического заболевания, помогает назначить оптимальную терапию.

ИГХ метод и анализ позволяют выявить злокачественную опухоль, установить генез, назначить адекватное лечение. При этом существует альтернативный способ определения биомаркеров на основе ДНК-биочипов.

Данный метод позволяет выявлять новые характеристики злокачественных образований, которые ранее не могли определяться с помощью световой микроскопии, такие как: метастазы рака толстой кишки, яичников, опухоли легкого.

Несмотря на очевидные преимущества нового метода, он к сожалению, пока не особо применим на практике, нет возможности обоснования того, что выявленные белки принадлежат именно опухолевой клетки. Однако, в ближайшем будущем, возможно применение данного метода существенно расширится.

Рис. 5. Алгоритм. Иммуногистохимический анализ на выявление эпителиоидноклеточных опухолей 

Что показывает

Биопсия с иммуногистохимией являются важной частью верификации диагноза при раке молочной железы, предстательной железы, мягких тканей и пр. Особенно актуально исследование для выявления лимфом, поскольку зачастую диагностировать эту болезнь без ИГХ невозможно.

Иммуногистохимия рака молочной железы полезна в прогнозировании течения опухолевого процесса и возможности таргентной терапии. Она помогает оценить:

  • функциональное состояние клеток образования;
  • злокачественный потенциал и темп роста опухоли;
  • тенденцию к метастазированию.

Как делается анализ?

Чтобы провести исследование, необходимы образцы самой опухоли и близлежащих тканей. Их можно получить при биопсии или после хирургического вмешательства. Материалу необходимо пройти несколько этапов подготовки перед исследованием: фиксация, промывание, обезвоживание, погружение в парафин или заливка другим веществом.

Иммуногистохимия (ИГХ-анализ) молочной железы

Исследуемый биологический объект должен получиться плотным, но не хрупким. Сначала материал промывают, обезвоживают и уплотняют в спиртах возрастающей крепости. Затем его просветляют путем погружения в смесь абсолютного спирта и О-ксилола в пропорции 1:1.

После этого помещают в несколько порций чистого О-ксилола. И только потом биологический объект пропитывают в парафине. Последний этап помогает законсервировать ткань и на долгое время сохранить ее структурные особенности в парафиновом блоке.

Затем лаборант производит с этих блоков срезы, при помощи специального прибора — микротома, толщиной до 1 мкм. Полученные срезы наклеивают на предметное стекло, которое смазано глицерином и смесью белка. Подсушивают.

Чтобы исследуемый материал вступил в реакцию с антителом, необходимо его обезжирить и удалить парафин. Процедура называется депарафинизация. Для ее проведения используют 3 порции О-ксилола, а также спирты нисходящей крепости.

Последний этап — окрашивание. Оно проводится для того, чтобы четко видеть структуру тканей под микроскопом. Лаборанты могут использовать огромное количество красителей. Условно их можно классифицировать по:

  • происхождению, например, животные — кармин, растительные — гематоксилин, синтетические — эозин;
  • химическим свойствам, например, нейтральные, основные, кислые.

Чаще всего для этой процедур используют эозин, гематоксилин. Биологический материал помещают в раствор гематоксилина на несколько минут, затем промывают и дифференцируют результаты окрашивания. После этого провидится окрашивание в эозине, промывание и обезвоживание в спиртах восходящей крепости.

Последовательная многоэтапная окраска позволяет на каждом этапе все больше определить нозологию и фенотип опухолевого образования. Патоморфолог изучает материл под микроскопом после каждого окрашивания. И только после оценки изменений и интерпретации полученной информации, назначает панель антител.

Чтобы получить точные данные о патологическом процессе и верифицировать заболевание  лаборант приступает к обработке подготовленного образца специальными реактивами, содержащими меченые антитела. В результате происходит реакция между антителом и антигеном.

ПОДРОБНОСТИ:   Когда сдавать анализы на женские гормоны: таблица когда сдавать, как правильно, в какие дни нужно

Что означают результаты?

Иммуногистохимия молочной железы — это сложный многоступенчатый анализ, на результат которого влияет множество факторов, например, низкое качество реагентов, недостаточная фиксация исследуемого биологического объекта или неправильно подобранная панель антител.

Гистологи оценивают интенсивность окрашивания опухолевых клеток после взаимодействия с реактивами по специальной шкале:

  • 0-1 — онкологии нет;
  • 2 — онкологическое образование отрицательное;
  • 3 — онкологическое образование положительное.

Длительность ИГХ при раке молочной железы во многом зависит от способа его проведения. Бывает ручной и автоматический. Последний считается более совершенным, поскольку вероятность технической ошибки сведена к минимуму, да и проводится он гораздо быстрее.

Перед определением тактики лечения онколог задается различными вопросами: какова вероятность рецидива заболевания у больного или его смерти, какой результат лечения можно ожидать. Для этого специалист изучает особенности и характеристики опухоли и в зависимости от различных предсказывающих и прогностических факторов назначает тактику лечения.

К этим факторам относятся основополагающие признаки, которые определяют особенность протекания болезни и ее исход. При операбельных формах онкологии груди к таким факторам относятся: морфологическое строение новообразования и его размер, состояние лимфоузлов. Т. е. подобные характеристики определяют хронологию болезни.

Особенности прогностических факторов:

  1. Базируются на биологических характеристиках опухолевого образования.
  2. Взаимосвязаны с продолжительностью жизни пациента в независимости от тактики терапии.
  3. Делят пациентов по степени риска смерти, рецидива.
  4. Примеры: индекс митотической активности, протеолитические ферменты, антиогенез и др.

Индекс митотической активности (MAI) является независимым прогностическим фактором, который характеризует продолжительность жизни больных. У пациентов с индексом меньше 10 в процессе наблюдения летальный исход составлял 6 %, у пациентов с индексом больше 10 — 28 %.

Протеолитические ферменты имеют значение в процессе метастазирования. В трансформированных злокачественных клетках таких ферментов вырабатывается больше, чем в здоровых, поэтому при злокачественных образованиях наблюдается выход этих веществ в межклеточное пространство и увеличение активности. Т. е.

Способность новообразования расти и метастазировать во многом зависит от ангиогенеза — образования новых кровеносных сосудов. В процессе наблюдения пациентов в течение 10 лет, было выявлено, что у женщин с высоким значением плотности микрососудов в опухоли прогноз хуже.

Эти факторы предсказывают эффективность лечения. Они помогают выделить группу пациентов с более-менее значимым ответом на проводимую терапию. К примеру, опреелить эффективность гормональных препаратов, уровень рецепторов стероидных гормонов.

К клиническим факторам, которые помогают интерпретировать ответ на терапию при метастатической форме рака относятся:

  1. Локализация и количественный показатель метастазов. Например, при поражении кости — прогноз относительно благоприятный; поражение кости, 2 органов, легких — менее благоприятный; при поражении больше 2 органов, наличии метастаз в печени, мозгу и пр. — неблагоприятный.
  2. Временной интервал между лечением первичного новообразования и появления метастазов. Чем он продолжительнее, тем благоприятнее прогноз.
  3. Общее состояние здоровья пациента.
  4. Возрастная категория. Женщины в постменопаузе имеют больше шансов на благоприятный ответ на терапию.
  5. Рецепторы стероидных гормонов в опухоли (гормононезависимые новообразования не реагируют на гормональное лечение).

Метастатический рак молочных желез считается хронической патологией. После полного регресса, полученного в результате химиотерапии, продолжительность жизни 5-10 лет встречается достаточно редко, примерно в 5-20 % случаев.

Поэтому для лечения считается оптимальным вариантом — последовательное применение лечебных воздействий с как можно меньшей токсичностью, чтобы получить максимальный паллиативный эффект и отсрочить прогрессирование патологии, смерти.

Достоверность результатов ИГХ молочной железы достигает 99 %. Методика чувствительна и высокоспецифичная. Она помогает верифицировать патологический процесс и установить стадию заболевания. Для ее проведения необходимо минимум биоптата и реактивов, при этом она будет информативна даже спустя длительное время после взятия биопсии.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Beauty-Krasota.ru
Adblock detector